腦脊液中腦膜癌細胞CEA表達的研究
【摘要】目的(de):聯合(he)應用(yong)(yong)免(mian)(mian)疫(yi)(yi)熒(ying)(ying)光(guang)(guang)細(xi)胞化(hua)學(xue)(xue)技術和(he)激(ji)光(guang)(guang)掃描共聚焦(jiao)顯微鏡技術(LSCM)檢測(ce)腦(nao)(nao)(nao)脊(ji)液中(zhong)腦(nao)(nao)(nao)膜(mo)癌(ai)(ai)(ai)細(xi)胞CEA的(de)表(biao)達部(bu)位(wei)并(bing)定量測(ce)定其熒(ying)(ying)光(guang)(guang)含量，探討該技術在腦(nao)(nao)(nao)膜(mo)癌(ai)(ai)(ai)病診斷中(zhong)的(de)價值(zhi)(zhi)。 方法(fa):應用(yong)(yong)免(mian)(mian)疫(yi)(yi)熒(ying)(ying)光(guang)(guang)細(xi)胞化(hua)學(xue)(xue)法(fa)以CEA標記腦(nao)(nao)(nao)膜(mo)癌(ai)(ai)(ai)細(xi)胞及對(dui)照(zhao)組腦(nao)(nao)(nao)脊(ji)液細(xi)胞，采(cai)用(yong)(yong)LSCM技術獲得腦(nao)(nao)(nao)膜(mo)癌(ai)(ai)(ai)細(xi)胞掃描圖像(xiang)并(bing)定量測(ce)定CEA熒(ying)(ying)光(guang)(guang)強度(du)值(zhi)(zhi)。結果:腦(nao)(nao)(nao)脊(ji)液中(zhong)腦(nao)(nao)(nao)膜(mo)癌(ai)(ai)(ai)細(xi)胞的(de)CEA表(biao)達為(wei)陽性(xing)，且(qie)部(bu)位(wei)在細(xi)胞漿中(zhong);CEA平均熒(ying)(ying)光(guang)(guang)值(zhi)(zhi)(36.80±17.17)，與對(dui)照(zhao)組(4.87±1.86)相比(bi)差異有統計學(xue)(xue)意義(P<0.01)。結論:聯合(he)應用(yong)(yong)免(mian)(mian)疫(yi)(yi)熒(ying)(ying)光(guang)(guang)細(xi)胞化(hua)學(xue)(xue)法(fa)和(he)LSCM檢測(ce)腦(nao)(nao)(nao)脊(ji)液細(xi)胞中(zhong)CEA的(de)表(biao)達可為(wei)腦(nao)(nao)(nao)膜(mo)癌(ai)(ai)(ai)病的(de)診斷提供可靠依據(ju)。
【關鍵詞】腦膜癌病;腦脊液;CEA;激光掃描共聚焦顯微鏡;免疫熒光
本科學研究共同應用領域免疫系統熒光上皮內部耐腐蝕技藝和激光機器掃描拍攝共凝聚顯微技藝對20例腦膜癌病(meningealcarcinomatosis,MC)自身的腦脊液上皮內部開始綠色健康熒光平均水平值(CEA)測量，以研討該方式在MC評估中的使用價值。1、材料與方法
1.1 標本來源：20例(li)MC患者為(wei)2007年8月(yue)至2008年8月(yue)本院(yuan)(yuan)、南京腦(nao)(nao)科醫院(yuan)(yuan)門診(zhen)及住院(yuan)(yuan)收(shou)治(zhi)。男(nan)(nan)9例(li)，女(nv)11例(li)，平均年齡(ling)51歲。按腫瘤(liu)來源：肺腺(xian)癌(ai)10例(li)、乳腺(xian)癌(ai)2例(li)、絨(rong)毛(mao)膜癌(ai)1例(li)、子宮(gong)內膜癌(ai)1例(li)、惡性髓母細胞瘤(liu)2例(li)、未找到(dao)原(yuan)發病(bing)(bing)(bing)灶4例(li)。16例(li)轉移癌(ai)病(bing)(bing)(bing)例(li)均由組織病(bing)(bing)(bing)理(li)證實。對照組20例(li)均為(wei)同期本院(yuan)(yuan)神經(jing)內科住院(yuan)(yuan)收(shou)治(zhi)，經(jing)腦(nao)(nao)脊液細胞學診(zhen)斷為(wei)病(bing)(bing)(bing)毒性腦(nao)(nao)膜炎且(qie)隨訪(fang)已治(zhi)愈(yu)。男(nan)(nan)8例(li)，女(nv)12例(li)，平均年齡(ling)41歲。
1.2 試劑與儀器：兔抗(kang)人CEA、FITC-羊抗(kang)兔IgG均購(gou)自北京博(bo)奧森(sen)生(sheng)物技術公(gong)司;Cytospin-3型細胞玻片離心儀(yi)，英國(guo)Shandon公(gong)司生(sheng)產;TCS-SP5型激光共聚焦掃描顯(xian)微鏡(jing)，德國(guo)Leica公(gong)司生(sheng)產，第三軍醫大(da)學提供使用。
1.3 方法
1.3.1 CEA標記：設(she)肺(fei)腺癌胸水陽性對照組(zu)、PBS自發熒光(guang)對照組(zu)、PBS+二抗(kang)熒光(guang)標記物(wu)對照組(zu)。標本玻片以10%羊血(xue)清封(feng)閉30min，滴加1∶100兔(tu)抗(kang)人CEA，置濕盒內37℃孵育(yu)1h,4℃過夜，再(zai)加入1∶20FITC-羊抗(kang)兔(tu)IgG,避光(guang)置濕盒內37℃孵育(yu)1h，滴加1∶1000DAPI室溫10min，甘油(you)封(feng)片，以上每(mei)步驟間均以0.01MPBS漂洗3遍。
1.3.2 激光掃描共聚焦顯微鏡觀察：分別(bie)用488nm和405nm波(bo)長的激(ji)光(guang)(guang)器(qi)激(ji)發綠色(se)和藍色(se)熒(ying)光(guang)(guang)。CEA相對熒(ying)光(guang)(guang)含量檢(jian)測結果以平均(jun)熒(ying)光(guang)(guang)值(zhi)和熒(ying)光(guang)(guang)強(qiang)度(du)地形立體分布(bu)圖表示。實(shi)驗組及對照(zhao)組各隨(sui)機選取200個(ge)(ge)高(gao)倍鏡視野的細胞(bao)，測定每個(ge)(ge)細胞(bao)內CEA含量的相對熒(ying)光(guang)(guang)值(zhi)及細胞(bao)面(mian)積、周長。
1.4 統計學方法：本實(shi)驗采(cai)用SPSS11.5統計軟件，組間(jian)比(bi)較采(cai)用t檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。
2、結果
2.1 LSCM掃描熒光圖像及CEA的表達部位：腦膜癌細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)的(de)(de)胞(bao)(bao)(bao)漿內可見(jian)分布(bu)均(jun)勻的(de)(de)綠(lv)色(se)熒光(guang)，CEA表達于胞(bao)(bao)(bao)漿;其余(yu)淋巴、單核細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)等(deng)僅(jin)見(jian)DAPI染色(se)的(de)(de)藍色(se)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)核，胞(bao)(bao)(bao)漿未(wei)著色(se)。對照組腦脊液細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)僅(jin)見(jian)藍色(se)的(de)(de)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)核，胞(bao)(bao)(bao)膜、胞(bao)(bao)(bao)漿及(ji)胞(bao)(bao)(bao)核內未(wei)見(jian)綠(lv)色(se)熒光(guang)，提示無CEA表達
2.2 CEA熒光強度地形立體分布圖：腦膜癌細(xi)胞圖(tu)像為不規(gui)則(ze)的蛋糕形，中心凹陷呈(cheng)火山口(kou)狀，底部可見藍(lan)色(se)(se)細(xi)胞核(he)(he)區(qu)域;胞漿(jiang)(jiang)區(qu)域呈(cheng)環(huan)形，頂端(duan)不平坦(tan)，黃(huang)、紅色(se)(se)山峰呈(cheng)鋸(ju)齒樣突(tu)起，相對(dui)熒光含量(liang)由低(di)到高(0→255)藍(lan)→綠(lv)→黃(huang)→紅。對(dui)照(zhao)組腦脊液細(xi)胞地形平坦(tan)，僅見藍(lan)色(se)(se)腎形細(xi)胞核(he)(he)區(qu)域，胞漿(jiang)(jiang)基本無熒光分布，單(dan)核(he)(he)細(xi)胞。
2.3 腦膜癌細胞與對照組腦脊液細胞CEA熒光相對含量及形態學參數比較：腦(nao)(nao)膜癌(ai)細胞(bao)與(yu)對照組腦(nao)(nao)脊液細胞(bao)CEA熒光含(han)量相(xiang)比(bi)差異有(you)(you)統計學意(yi)(yi)義(P<0.01)，腦(nao)(nao)膜癌(ai)細胞(bao)的面積、周長與(yu)對照組腦(nao)(nao)脊液細胞(bao)相(xiang)比(bi)差異有(you)(you)統計學意(yi)(yi)義(P<0.01)。
幾組腦脊液內部EMA/CEA熒光相較濃度及要素學產品參數的特別3、討論
MC是因為惡變良性惡性腫瘤在蛛網膜下腔和軟膜內彌漫著性轉至而激發的一產品系列臨床藥理檢驗綜上征，在癌癥晚期提高中發生比率5%-8%，現下有升發展[1]。癌癥、乳腺癌癌、直可以使腸胃癌是腦膜癌最易見的原發灶，腺癌是其主要團隊類型的[2]。腦膜癌病臨床藥理檢驗現象更復雜，在腦脊液中遇到腦膜癌內部是初步判斷本病的最終能夠原則[3]。據簡報[4]MC提高初次腰穿發現了良性惡性腫瘤內部的呈陽性率僅為45%-60%。 劉振華等[5]有關資料常見CSF神經通過核學感覺惡性癌癥癌癥神經通過核的抗原陽型率有41.86%，采用CEA天然天然免疫系統力神經通過核化學上的物質法可將抗原陽型率增進到83.72%。Liu等[6]有關資料CEA等上皮源于的標記圖片物在腦膜癌組的抗原陽型例數為80%，在良惡性癌癥腦膜瘤組為0%，提醒多抗原天然天然免疫系統力組化檢驗可怎么惡性癌癥癌癥神經通過核的通過源于。本監測所MC組CEA抗原陽型率有90%(18/20);常見MGG刺繡劑抗原陽型率60%(12/20)，倆者不同之處差別的有測算表學意義所在所在(P<0.05)，提醒天然天然免疫系統力神經通過核化學上的物質刺繡劑可顯著性增進腦膜癌病的的診斷率，與內部外監測不符。Martínez等[7]采用天然天然免疫系統力熒光雙標和LSCM技術工藝對腦膜血官外皮神經通過核瘤中的抑癌什么是基因通過了監測。岳劍寧等[8]用LSCM對腦脊液淋疤敗血癥神經通過核線粒體通過了三維3d立體、按量監測。LSCM觀察植物探及神經通過核核與DAPI結合實際呈簡約清澈澄明的藍熒光，末見有機熒光，提醒胞核內無CEA表示;胞漿內探及布置不均區粗糙的簡約清澈澄明的有機熒光，提醒CEA表示于胞漿，與內部外有關資料不符[9]。從熒光撓度丘陵地形三維3d立體布置不均區圖探及腦膜癌神經通過核胞核CEA分子量不多，而胞漿內CEA分子量較高，亦與出現布置不均區同樣。比較組神經通過核大小和周長相對比較性較小，胞漿內CEA分子量太低;而腦膜癌神經通過核大小和周長相對比較性很大的，胞漿內CEA分子量較高，幾組直接不同之處差別的有測算表學意義所在所在(P<0.01)。本監測所MC組中2例髓母神經通過核瘤檢驗CEA弱陽，與論文有關資料不符[10]。【參考文獻】
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