卵巢惡性腫瘤的DNA倍體分析及臨床意義
【摘要】目的:分析卵巢惡性腫瘤及交界性腫瘤的DNA倍體，探討其臨床意義。方法:采用流式細胞術測定新鮮卵巢惡性腫瘤及交界性腫瘤組織標本的DNA倍體。結果:6例正常卵巢組織均為DNA二倍體，30例卵巢惡性腫瘤及交界性腫瘤中DNA異倍體23例(76.67%)，其中20例上皮性惡性卵巢腫瘤DNA異倍體15例(60%)，5例非上皮性卵巢癌DNA異倍體5例(100%)，5例交界性卵巢腫瘤DNA異倍體3例(60%);與正常卵巢組比較差異有統計學意義(P<0.01);卵巢惡性腫瘤的DI值與病理類型及臨床分期無關(均P>0.05)。結論:DNA倍體測定可用于卵巢惡性腫瘤的輔助診斷。
【關鍵詞】卵巢癌 DNA倍體 病理分級
卵巢癌是婦科常見的惡性腫瘤之一，也是目前死亡率最高的婦科惡性腫瘤。其早期缺乏特異性臨床指征，腫瘤細胞組織學分類復雜，50%～70%患者就診時已屬晚期。人體正常細胞是恒定的DNA二倍體或四倍體，當受到致癌因素刺激時，DNA被損傷成為DNA異倍體細胞，本文分析卵巢惡性腫瘤及交界性腫瘤的DNA倍體，可為卵巢腫瘤的診斷和預后判斷提供依據。
1、材料和方法
1.1 病例資料
取寧夏地區2005年7月-2005年12月期間手術并經病理學證實為卵巢惡性或交界性腫瘤的患者30例，患者年齡平均46.1歲，最小21歲，最大71歲。所有患者術前均未接受化療及放療，參照WHO制定的組織學分類標準，其中交界性卵巢腫瘤5例(交界性漿液性囊腺瘤3例，交界性黏液性囊腺瘤2例);上皮性卵巢癌20例(漿液性囊腺癌12例，黏液性囊腺癌8例)，非上皮性卵巢癌5例(其中顆粒細胞瘤3例，轉移性卵巢癌2例);組織學分級采用3級分法。25例卵巢癌中，病理分化程度為中-高分化者6例，低分化者19例;根據國際婦產科聯盟(FIGO)2000年分期標準，Ⅰ期7例，Ⅱ期7例，Ⅲ期11例，無Ⅳ期病例。另取同期因其它良性疾病同時行卵巢切除，并經病理學證實卵巢組織無異常病理的患者6例為正常對照組，其中，子宮肌瘤3例，宮頸原位癌2例，單側卵巢單純性囊腫1例，平均年齡42.3歲。
1.2 實驗方法
1.2.1 單細胞懸液制備：取手術切除的新鮮腫瘤組織標本或-180℃凍存的腫瘤組織，進行HE染色，選擇瘤細胞含量豐富的標本制備單細胞懸液①，進行DNA倍體測定。
1.2.2 DNA倍體測定：采用美國Becton-Dickinson公司生產的FACSCalibur型流式細胞儀進行測定，每份標本測定104個細胞核，以正常卵巢組織作為外標。DNA指數(DI)為異倍體G0/G2峰均道指與二倍體G0/G1峰均道指之比，表示DNA相對含量;當DNA直方圖上只有一個G0/G1(D1=1)時為DNA二倍體;若出現明顯的2個或2個以上G0/G1(D1>1.1)，且其后有相應的S期及G2M期峰為異倍體②。
1.3 統計學方法實驗數據以均數±標準差(±s)表示，樣本率的比較采用卡方檢驗，兩樣本均數的比較采用方差分析，以P<0.05為差異有統計學意義;本實驗數據采用SPSS12.0分析軟件進行分析。
2、結果
2.1 各組DNA異倍體率比較
6例正常卵巢組織均為DNA二倍體;30例卵巢惡性腫瘤及交界性腫瘤中DNA異倍體23例(76.67%)，其中20例上皮性惡性卵巢腫瘤DNA異倍體15例(60%)，5例非上皮性卵巢癌DNA異倍體5例(100%)，5例交界性卵巢腫瘤DNA異倍體3例(60%)，與正常卵巢組比較差異均有統計學意義(均P<0.01)。
2.2 各組細胞DI值比較
2.3 不同病理類型卵巢癌DI值的比較
2.4 不同臨床分期卵巢惡性腫瘤DI值比較
3、討論
在生物細胞中，DNA含量是恒定的參量，并隨細胞周期發生有規律的變化。腫瘤的發生有其復雜的病因學和病理學機制，但機體細胞內在的遺傳物質變化是一切腫瘤發生的基礎。人體正常的體細胞染色體均為二倍體，當細胞受到致癌物質刺激，DNA損傷，導致細胞基因突變與染色體畸形斷裂，使細胞在增殖分裂的過程中出現DNA量的丟失、擴增或染色體移位等，導致細胞DNA質和量的異常，使原有的細胞生物學特征發生改變，成為DNA含量異常的腫瘤細胞②。在二倍體基礎上多或少一條或幾條染色體，或者染色體組成發生增減的細胞個體成為異倍體(Heteroploid)。
研究表明，人類大多數腫瘤細胞的染色體都有異常，表現為染色體結構和數目的異常。文獻報道，卵巢癌組織中DNA異倍體的檢出率在51%～82%之間③。本實驗中30例卵巢惡性腫瘤及交界性腫瘤DNA異倍體率為76.67%，上皮性卵巢癌DNA異倍體率為60%，與文獻報道相符，6例正常卵巢組織均為二倍體，無異倍體出現，惡性卵巢腫瘤組織中DI值明顯高于正常卵巢組織，進一步證實惡性腫瘤標本的DNA含量發生改變，通過對細胞DNA含量的研究，有助于卵巢惡性腫瘤的定性診斷。
目前，對于卵巢惡性腫瘤DNA含量與病理類型的關系尚有爭論④。本實驗中，5例非上皮性卵巢癌均出現DNA異倍體，其DI值與上皮性卵巢癌比較差異無統計學意義，但由于本組樣本例數較少，尚不能得出結論。
有關DNA含量及DNA倍體與卵巢惡性腫瘤臨床分期的關系已有一些報道，一些研究認為，卵巢惡性腫瘤DNA含量及DNA異倍體率隨著臨床分期的增加而增高，但也有不同報道，本實驗結果顯示，DI值及DNA異倍體率與臨床分期無關。
卵巢交界性腫瘤(borderlineovariantumors,BOT)又稱為具有低度惡性潛能的卵巢上皮性腫瘤(ovarianepithelialtumoroflowmalignant,LMP)，是一組介于良、惡性腫瘤之間的一類特殊類型的卵巢腫瘤，1973年世界衛生組織正式將其命名。Karen等⑤對交界性卵巢腫瘤進行DNA定量分析，初步研究結果表明DNA異倍體交界性卵巢腫瘤惡性程度高、易復發，生存期短，但也有人持不同意見。本研究5例交界性卵巢腫瘤，其中有3例出現DNA異倍體，異倍體率為60%，且其DI值低于卵巢惡性腫瘤組，兩組比較差異有統計學意義。有研究認為，異倍體交界性腫瘤較二倍體腫瘤復發的危險性明顯增高，此外，部分交界性腫瘤難以與卵巢癌鑒別。DNA異倍體的出現是癌變的重要標志，是否可以將DNA二倍體交界性卵巢腫瘤視為低度惡性潛能的腫瘤，而將DNA異倍體交界性卵巢腫瘤視為卵巢癌，有待于進一步研究。
【參考文獻】
[1]王延魁，孫元玲，錢和年，等.有差異 標本的方法對上皮性暖巢癌流式癌細胞術癌細胞DNA含氧量的關系[J].我們常用皮膚科與產科期刊雜志，2004，12(3)：153. [2]石永紅，孫慧寬.C-erbB-2表明及DNA 量與乳腺炎癌機構學類型、的相應的性研究方案[J].臨床藥理與科學試驗方面的問題學報紙,1998,4：448. [3]Braly PS,Klevecz RR. Flow cytometric evaluation of ovarian cancer[J]. Cancer,2003,71(4): 1621-1630. [4]Fribhmder ML. Clinical and biological significance of anerploidy in human tumors[J]. J Clin Pathol,2001,39:961. [5]Kaern J,Trope C,Kjorstad KE,et al. Cellular DNA content as a new prognostic tool in patients with borderline tumors of ovary[J]. Gynecol Oncol,2005,38(3):452.
