非綜合征性唇腭裂患者血漿代謝組學的初步研究

發布時間：2011/11/28 16:40:00

【摘要】目的(de)(de)(de):初步研究非綜合(he)征(zheng)性(xing)唇腭(e)裂(lie)患(huan)者可能存(cun)(cun)在(zai)(zai)(zai)的(de)(de)(de)代(dai)(dai)(dai)謝(xie)(xie)機(ji)制，同(tong)(tong)時(shi)探討基(ji)于核(he)磁(ci)共振(zhen)(NMR)的(de)(de)(de)代(dai)(dai)(dai)謝(xie)(xie)組學(xue)技(ji)術(shu)(shu)在(zai)(zai)(zai)臨床應(ying)用中的(de)(de)(de)可行性(xing)。方法(fa):分(fen)(fen)別收(shou)集10例非綜合(he)征(zheng)性(xing)唇腭(e)裂(lie)患(huan)者和(he)10例正(zheng)常(chang)(chang)人的(de)(de)(de)血(xue)(xue)漿，在(zai)(zai)(zai)核(he)磁(ci)共振(zhen)儀(yi)上對血(xue)(xue)漿樣(yang)(yang)本進(jin)行采(cai)樣(yang)(yang)，獲得一(yi)系列原(yuan)始的(de)(de)(de)一(yi)維NMR譜圖(tu)，然后使用MESTRE-v4.7軟件對NMR譜圖(tu)進(jin)行積分(fen)(fen)簡(jian)化數據，將(jiang)譜圖(tu)分(fen)(fen)解成(cheng)212個(ge)區域進(jin)行積分(fen)(fen)，得到(dao)積分(fen)(fen)強(qiang)度，利用SIMCA-P11.0軟件對積分(fen)(fen)強(qiang)度進(jin)行主(zhu)成(cheng)分(fen)(fen)分(fen)(fen)析。結(jie)果:非綜合(he)征(zheng)性(xing)唇腭(e)裂(lie)患(huan)者和(he)正(zheng)常(chang)(chang)人的(de)(de)(de)血(xue)(xue)漿代(dai)(dai)(dai)謝(xie)(xie)存(cun)(cun)在(zai)(zai)(zai)差異，至(zhi)少存(cun)(cun)在(zai)(zai)(zai)3種不同(tong)(tong)的(de)(de)(de)代(dai)(dai)(dai)謝(xie)(xie)產(chan)物(wu)(wu)(wu)，分(fen)(fen)別為三羥(qian)(qian)丁酸(suan)γ甲基(ji)類(lei)物(wu)(wu)(wu)質(zhi)、精氨(an)酸(suan)和(he)纈氨(an)酸(suan)。非綜合(he)征(zheng)性(xing)唇腭(e)裂(lie)患(huan)者血(xue)(xue)漿代(dai)(dai)(dai)謝(xie)(xie)產(chan)物(wu)(wu)(wu)以纈氨(an)酸(suan)和(he)三羥(qian)(qian)丁酸(suan)γ甲基(ji)類(lei)物(wu)(wu)(wu)質(zhi)為主(zhu)，而正(zheng)常(chang)(chang)人血(xue)(xue)漿代(dai)(dai)(dai)謝(xie)(xie)產(chan)物(wu)(wu)(wu)則(ze)以精氨(an)酸(suan)為主(zhu)。結(jie)論(lun):通過(guo)代(dai)(dai)(dai)謝(xie)(xie)組學(xue)技(ji)術(shu)(shu)，可以初步探討非綜合(he)征(zheng)性(xing)唇腭(e)裂(lie)患(huan)者的(de)(de)(de)代(dai)(dai)(dai)謝(xie)(xie)機(ji)制，同(tong)(tong)時(shi)該技(ji)術(shu)(shu)有望應(ying)用于臨床。

【關鍵詞】代謝組學;非綜合征性唇腭裂;主成分分析

非綜合征性唇腭裂是口腔頜面部最常見的先天性發育畸形，占整個頜面部面裂畸形的70%以上。該病發病因素復雜，對其病因學的研究意義重大。若能明確其發病原因，并采取有效的干預措施，有望從根本上預防該疾病的發生。目前，對唇腭裂的病因學研究取得了一定的進展，如發現唇腭裂是多因素遺傳疾病，與孕期吸煙、用藥等因素有關等^①③，但其(qi)(qi)確切的代謝(xie)機(ji)制和發(fa)病原因尚不清(qing)楚。本文通過研究非綜合征性(xing)唇(chun)腭裂患者血漿的代謝(xie)機(ji)制，推(tui)斷(duan)其(qi)(qi)潛在的發(fa)病原因，同時探討基(ji)于核(he)磁共振(nu-clearmagneticresonance，NMR)的代謝(xie)組學在臨(lin)床應用中的可行性(xing)。

1、材料和方法

1.1 試驗儀器

本試驗報告用的最主要的測量器材有：BrukerAvanceDRX600磁共振現象儀(Bruker廠家，國外);XYJ80-2底速抽濾機(福建金壇調查測量器材限制廠家);MR1812繞城高速抽濾機(Jouan廠家，國外);4mL肝素鈉抗凝管(BectonDickinson廠家，新西蘭);FD-1冷凍冰箱吹干機(蘇州博康調查測量器材限制廠家)。

1.2 研究對象的選擇

隨機性性的的選擇2004—2003年在云南讀書華西嘴巴醫療唇顎裂美容外科行內窺鏡手術緩解的非宗合征性唇顎裂客戶10例成為病歷組，在這其中單一的性顎裂客戶6例，唇顎裂連接數顎裂客戶4例;中國婦女8例，男孩子2例;年限6～19歲，最低值年限(12.6±6.5)歲。同樣隨機性性的的選擇2004—2003年在云南讀書華西醫學中心局婦幼養身院查體的更平常人10例成為剖析組，中國婦女8例，男孩子2例;年限7～20歲，最低值年限(13.0±5.1)歲。病歷組融入 標：檢驗為非宗合征性唇顎裂的客戶，無同一整體性急病。是排除標：1)有著宗合征性唇顎裂如Shprintzen宗合征或Robbin宗合征者;2)有著遺傳性排泄缺點

如楓糖尿癥患者;3)臨床生化結果異常者，或者患有血液系統疾病者;4)傳染病患者如獲得性免疫缺陷綜合征、B或C型肝炎等^④⑤。

1.3 研究方法

1.3.1 樣本采集及處理 樣本(ben)采集(ji)前，2組研究(jiu)對(dui)象(xiang)要(yao)求空腹6h。樣本(ben)采集(ji)于上午9時左(zuo)右在室溫(wen)(wen)下進行(xing)。抽(chou)取(qu)研究(jiu)對(dui)象(xiang)靜脈(mo)血液(ye)(ye)(ye)4mL，緩(huan)慢注入4mL肝素鈉抗凝管(guan)(guan)中，室溫(wen)(wen)下1500r/min低(di)速離心(xin)10min，以去除全血中血細(xi)胞等大分子(zi)物質。離心(xin)后(hou)用移液(ye)(ye)(ye)槍吸(xi)取(qu)上清液(ye)(ye)(ye)(即血漿(jiang)(jiang))2mL放入EP管(guan)(guan)內(nei)，進行(xing)二次離心(xin)(4℃下20000r/min離心(xin)10min)，以去除血漿(jiang)(jiang)中的雜質，保留血漿(jiang)(jiang)中的小(xiao)分子(zi)代謝物質。離心(xin)后(hou)吸(xi)取(qu)上清液(ye)(ye)(ye)1.8mL放入干凈的EP管(guan)(guan)內(nei)，將(jiang)樣本(ben)進行(xing)凍干處理(li)，然后(hou)保存在-20℃低(di)溫(wen)(wen)冰箱中備(bei)用。

1.3.2 NMR數據的采集 將凍(dong)干處理過(guo)的(de)血漿(jiang)樣(yang)(yang)本在(zai)(zai)(zai)室溫下(xia)解凍(dong)，將450μL解凍(dong)樣(yang)(yang)本移入干凈的(de)核磁管內，以體積(ji)比1∶10的(de)比例緩慢(man)加入重水至500μL，混勻，靜置5min。每個(ge)樣(yang)(yang)本制(zhi)(zhi)備完成后(hou)直接(jie)在(zai)(zai)(zai)核磁共振(zhen)儀(yi)上(shang)進(jin)行光譜(pu)(pu)采集，獲(huo)得(de)原(yuan)(yuan)始(shi)的(de)一維(wei)氫譜(pu)(pu)。光譜(pu)(pu)采集在(zai)(zai)(zai)室溫下(xia)進(jin)行，采樣(yang)(yang)點(dian)數是32k，累加次(ci)數128次(ci)，核磁共振(zhen)儀(yi)實際工作頻率(lv)為600.13MHz。掃(sao)描對水峰進(jin)行抑(yi)制(zhi)(zhi)的(de)原(yuan)(yuan)始(shi)一維(wei)氫譜(pu)(pu)，可以獲(huo)得(de)

131071個數據文件表格點，其峰長度為7788.16Hz，面積是較為小的頻繁為-1073.15Hz。掃苗未進行水峰治理和改善的氫譜同個可提升131071個數據文件表格點，其峰長度為7183.91Hz,面積是較為小的頻繁為-651.29Hz。

1.3.3 NMR數據后加工過程和化學計量分析方法 所有樣本的自由感應衰減(freeinductiondecay，FID)信號導入MESTRE-v4.7軟件進行傅里葉轉換(Fouriertransform，FT)，獲得一維NMR譜圖，將所獲得的譜圖進行基線調整。由于δ4.52～6.00含有水峰^⑥⑦，該區域(yu)的(de)化(hua)學(xue)位(wei)移(yi)(yi)被排除(chu)在(zai)外。將各個(ge)(ge)(ge)樣本的(de)氫(qing)譜(pu)δ0～4.52及δ6～10按(an)(an)bin0.04為單(dan)位(wei)進行(xing)(xing)分(fen)割(ge)，得(de)到(dao)212個(ge)(ge)(ge)化(hua)學(xue)位(wei)移(yi)(yi)值(zhi)段，進一步按(an)(an)各化(hua)學(xue)位(wei)移(yi)(yi)值(zhi)段分(fen)別積分(fen)，即得(de)到(dao)與(yu)各個(ge)(ge)(ge)化(hua)學(xue)位(wei)移(yi)(yi)值(zhi)段相對(dui)(dui)應的(de)積分(fen)值(zhi)，這樣就簡化(hua)了原始數(shu)據(ju)(圖1)。對(dui)(dui)每個(ge)(ge)(ge)樣本進行(xing)(xing)光(guang)譜(pu)采集，可(ke)獲(huo)得(de)20組數(shu)據(ju)，構(gou)成(cheng)1個(ge)(ge)(ge)n×d二維(wei)矩陣(zhen)(其中n為樣本組數(shu)，d為積分(fen)區間數(shu))，這樣更具有統計學(xue)意義。將數(shu)據(ju)導入Excel文(wen)件中備用。使用SIMCA-P11.0軟(ruan)件對(dui)(dui)該二維(wei)矩陣(zhen)進行(xing)(xing)化(hua)學(xue)計量處理(li)，主要進行(xing)(xing)主成(cheng)分(fen)分(fen)析(principalcompo-nentanalysis，PCA)。

2、結果

本研究中所建立的新變量模型含有9個主成分(principalcomponent，PC)，前2個主成分(PC1和PC2)的累積貢獻率為93.5%，說明所建立的變量具有很好的預測性。前2個主成分的PC圖見圖2。由圖2可以看出，對照組樣本間變異較大，病例組樣本間則具有高度相似性，但這2個主成分不能完全區分2組的樣本。第2和第3個主成分(PC2和PC3)的PC圖見圖3，這2個主成分可以區分病例組和對照組，因此筆者選用PC2和PC3作為研究對象。圖4為PC2和PC3的因子負荷圖，可見圖中大多數點集中于原點，表現為重疊點，即具有相同的代謝產物，也就是說病例組和對照組具有相同的代謝產物;但是有少數的點遠離原點，這些點所代表的化合物造成了某些樣本間血漿代謝物的差異，主要表現為氨基酸及脂類物質的異常代謝。對這些異常代謝物作進一步分析，引起這種差異的代謝物的NMR峰主要集中在δ1.20、δ1.80、δ3.60(圖4)。對發生變化的NMR譜峰進行分析，這些化學位移值分別代表一些氨基酸及脂類物質，如精氨酸、纈氨酸和三羥丁酸γ甲基類物質等^⑥⑧。對照組(zu)血漿(jiang)代謝產(chan)物(wu)(wu)中(zhong)以精氨(an)酸(suan)為主，而病例組(zu)血漿(jiang)代謝產(chan)物(wu)(wu)則含有三(san)羥丁酸(suan)γ甲(jia)基類物(wu)(wu)質(zhi)和纈(xie)氨(an)酸(suan)。

3、討論

先天不足性唇兔唇危害性著口腔醫院頜面人體器官的形態特征及效果，較為嚴重決定了寶寶出生入口業務素質及母嬰用品自我意識通常。從基因基因學上，該常見皮膚疾病可構成綜和征性唇兔唇和非綜和征性唇兔唇，這之中非綜和征性唇兔唇十分多見。非綜和征性唇兔唇是一種個繁多的、由基因基因和生態環境原則上下級功效可致的常見皮膚疾病，其細胞新陳基礎排泄產品或許會誕生錯誤表達方法出。本研發靈活運用細胞新陳基礎排泄組學對10例非綜和征性唇兔唇病員和10例通普通人展開闡述，基本了解一下非綜和征性唇兔唇病員的細胞新陳基礎排泄長效機制。結論發現，非綜和征性唇兔唇病員和通普通人處于血漿細胞新陳基礎排泄產品上都存在不同之處，其不同之處大部分突出表現在某種酪氨酸等的錯誤細胞新陳基礎排泄上，如精氨酸和纈氨酸。通普通人血漿細胞新陳基礎排泄產品中以精氨酸主導，得以綜和征性唇兔唇病員血漿細胞新陳基礎排泄產品則含有三羥丁酸γ甲基類材料和纈氨酸。精氨酸是鳥氨酸不斷循環中的很重要的組合成材料，具備極為很重要的的順利效果，在嬰孩園健康中起著很重要的的功效，若欠缺則難以保護嬰孩園通常的生長的與健康。纈氨酸為須要酪氨酸等，功效于黃體、乳腺炎及子宮卵巢，其效果大部分是保護面神經體統效果通常。三羥丁酸γ甲基類材料在血漿中突出表現為高密度計算脂核核蛋白，在某種癌癥病員血漿中突出表現為高表達方法出的巖藻糖甲基脂核核蛋白。 本探討報告表示，相結合消化吸收組學系統可以中期塞查某項疾病癥狀并淺談其消化吸收系統，也證明在這兒基本上判斷其暗藏的復發原由是有用的。但本探討不僅在系統步驟進取行沒事些探討，求得了環節急于義的報告，在下步驟事業中，本仙女擬從兩隊面去堅持問題導向的探討：單各部分從緊把控好受試者的飯食，常見是嚴令禁止享用具有刺激性肉和大櫻桃等食物，會因為消化吸收組學易遭受到飯食習性、生活水平的方式人文水平差異性等主觀因素的危害;另單各部分應范疇模板水分含量，使其最能體現有統計顯示學意議上。探討生態學體液最行之有效和多方位的步驟是對其dna、蛋清質表達做法水靜謐消化吸收含量來去資料監測。怎么樣把消化吸收組學資料和轉錄組學、蛋清質組學、遺傳性學、酶學、消化吸收手段和表演型具體概述的資料資源優化配置在來，并明確生態學學功能鍵的解悉是很急難險重的的任務。想一想的資源優化配置不僅要須得應適當的資料庫外，還須得各種一流的數學3具體概述步驟。漸漸dna組學、蛋清質組學和消化吸收組學認識自己的源源總是堅持問題導向和探討事業的源源總是積淀，等等系統緣何會愈來愈越范圍廣地廣泛應用于生態學臨床醫學探討此中。

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